Материал для ПЦР-исследований.
Правила взятия, обработки и хранения биопроб.
Для получения адекватных результатов ПЦР-анализа большое значение имеет качество взятия образца для исследования, его хранение, транспортировка и предварительная обработка.
ПЦР-анализ относится к прямым методам лабораторного исследования - образец анализируется на наличие ДНК возбудителя. Поэтому для ПЦР-анализа пригоден любой клинический материал, потенциально содержащий возбудителей инфекций. Выбор клинического материала для анализа должен определяться наиболее вероятным местом локализации возбудителя.
Общие рекомендации по взятию биопроб для ПЦР-анализа:
- Взятие материала производится из предполагаемого места обитания микроорганизма. Различные микроорганизмы имеют свои особенности локализации, пути распространения и выделения. Это следует учитывать при выборе наиболее адекватного места взятия биопробы.
- Взятие биологического материала, по возможности, должно проводиться в период обострения инфекции. За 7 дней до взятия материала на исследование необходимо прекратить прием химиопрепаратов и лечебные процедуры. Материал для исследования из урогенитального тракта у женщин следует брать перед менструацией или через 1-2 дня после ее окончания. Женщины накануне обследования не должны проводить туалет наружных половых органов и спринцевание.
Взятие биоматериала для контроля эффективности лечения должно проводиться не ранее чем через 4 недели после окончания терапии.
- Количество материала, забираемого для исследования не должно быть избыточным, т.к. вместе с возбудителем в пробу попадают вещества, которые могут вызывать ингибирование ПЦР или могут способствовать деградации ДНК при хранении и транспортировке. При взятии мазков и соскобов достаточное количество материала - размером “со спичечную головку”. Наиболее адекватным инструментом для взятия соскобов и мазков для ПЦР-анализа является специальный урогенитальный зонд (щеточка), который собирает необходимое количество эпителия, не травмируя слизистую, почти не впитывает образец и хорошо отдает собранный материал в жидкую транспортную среду.
- Для взятия биопроб необходимо пользоваться только одноразовым инструментом и одноразовыми пластиковыми контейнерами (или пробирками с транспортной средой) с плотно закрывающейся или завинчивающейся крышкой.
- Для исключения ложно-положительной реакции при исследовании на определенные виды гельминтов рекомендуется за 5 дней до обследования исключить из пищи мясные продукты.
Взятие материала для ПЦР-исследований:
| БИОПРОБЫ ИЗ УРОГЕНИТАЛЬНОГО ТРАКТА | |
| После взятия материала врачом погрузить зонд в пробирку с 200 мкл реагента “ДНК-ЭКСПРЕСС”, несколько раз вращать и, отжав остатки раствора о стенки, удалить зонд из пробирки. Пробирку плотно закрыть и промаркировать. Оставлять наконечник зонда в пробирке с биопробой не рекомендуется. | |
| ПРОЧИЕ ОБРАЗЦЫ | |
| Моча | - собрать первую порцию утренней мочи в количестве 20-50 мл в сухой стерильный флакон с плотно завинчивающейся крышкой;- моча для исследования должна быть свежей (не охлаждать и не замораживать!);- мочу профильтроватьчерез милипоровый нанофильтр согласно инструкции. |
| Слюна, спинномозговая жидкость (ликвор), синовиальная жидкость, слезная жидкость | - отобрать 1-1,5 мл исходного материала в сухую стерильную пробирку типа Эппендорфф вместимостью 1,5 мл; - материал для исследования должен быть свежим (не охлаждать и не замораживать!); |
| Мазок из ротоглотки | - взятие мазка проводить натощак или не ранее, чем через 2-4 часа после еды; - корень языка придавить шпателем, материал взять стерильным зондом вращательными движениями с поверхности миндалин, небных дужек или задней стенки глотки; - извлечь зонд, не касаясь языка, слизистой щек и зубов и опустить в пробирку с реагентом “ДНК-ЭКСПРЕСС”; |
| Соскоб с коньюктивы | - при наличии обильного гнойного отделяемого убрать его стерильным ватным тампоном, смоченным физиологическим раствором; - взять соскоб с внутренней поверхности нижнего века движением к внутреннему углу глазной щели, при взятии соскоба необходимо придерживать веко руками, чтобы при моргании ресницы не касались зонда; - извлечь зонд и опустить в пробирку с реагентом “ДНК-ЭКСПРЕСС”; |
| Мокрота, плевральная жидкость | - мокрота в количестве 0,5 – 1,0 мл помещается в стерильную пробирку с реагентом «ДНК-Экспресс», пробирку плотно закрыть. |
| Кал | - Кал в количестве 20 – 30 мг ( объем спичечной головки) собрать с поверхности с 3- 5 участков и поместить в пробирку с транспортной средой (для гельминтов). Хранить отобранный материал в холодильнике при + 4С-+6С . Материал не должен подвергаться УФЛ – облучению, замораживанию. Рекомендации: Материал с кровью не исследуется. У новорожденных детей кал отбирают с хлопчатобумажной пеленки сразу после испражнения, нельзя отбирать материал с памперса. На исследования нельзя направлять кал после клизмы, введения свечей, приема касторового масла, вазелинового масла. Кал для исследования должен быть сухой, не должен содержать посторонних примесей (мочи, воды из унитаза). Перед дефекацией на стульчак одеть одноразовый пластиковый пакет. |
| МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКАЯ (ПЦР) ДИАГНОСТИКА ДЕРМАТОФИТЫ | Материалом для исследования на дерматофиты служат: - фрагменты ногтевой пластинки (на границе пораженного ногтя и здорового ногтя), материал собрать в сухую пробирку Эппендорф; - волосы ( 10 -20 -50 волосинок щипчиками выдернуть, отрезать прикорневую зону вместе с луковицами волос, а также чешуйки гриба в прикорневой зоне), материал собрать в сухую пробирку Эппендоррф; - соскоб с кожи ( участок на границе здоровой и пораженной кожи смазать вазелиновым маслом и скарификатором сделать соскоб ), материал поместить в сухую пробирку Эппендорф. |
| АКНЕ: соскоб с кожи, ресничная проба | В течение суток перед анализом не следует умываться. Также нельзя пользоваться косметическими средствами (лучше прекратить использование косметики за несколько дней до сдачи анализа).Забор анализа желательно делать после 18-00, так как клещ избегает солнечных лучей, и в дневное время его активность минимальна. Соскоб кожи проводится с пораженных участков эпидермиса с использованием глазной ложечки или скальпеля, а также путем выдавливания содержимого фолликула. Биоматериал с кожи врач-дерматолог собирает скальпелем- методом соскоба. Частички кожи следует поместить в отдельную пробирку «Эппендорф» содержащую специальную транспортную жидкость; Ресничная проба: Для ресничной пробы с каждого глаза при помощи пинцета берётся 8 ресниц — 4 с верхнего века, и 4 — с нижнего века и поместить их в отдельные пробирки «Эппендорф» содержащую специальную транспортную жидкость. Пробирки для ресниц должны быть подписаны: «правый глаз» и «левый глаз». |